01、发酵罐是否需要清洗验证？

　　经验因素：

　　以微生物为生产菌株，或用于生产菌体，或用于生产初级或次级产物，或进行生物转化，大规模的现代化发酵在中国也几十年了，没有得出发酵罐清洗会对终产品有风险的结论，所以目前微生物发酵罐的清洗没有统一验证规范，各个企业对策也不同：有些企业严格参照制药设备的标准进行验证，而有些企业则不做。

客观因素

　　另外还有其他理由：

　　1、在敞开环境用自来水配制和洗罐，与在洁净室用纯化水，注射用水的制药设备等级不同，按照制药设备的等级进行验证，成本也不允许。

　　2、发酵原料复杂，有机氮源多来自农产品，而农产品已经受到了工业废物、及抗生素等的污染，这些因素带来的风险比罐清洗残留污染大得多，大的风险不顾，而来抓小风险，与事无补。

　　3、发酵结果的波动，受到多方面的影响，从来没有听闻将罐的清洗残留作为一项原因。

　　4、发酵培养基需要高温灭菌，所以不涉及清洗好的罐又被环境微生物污染的风险。

　　是不是要验证？

　　基于以上原因，讨论也不会有结果。实际上，企业应该根据自己产品的特点和利益相关方的要求决定本企业是否应该进行清洗验证。

　　02、清洗验证的目的和定义

　　发酵罐清洗目的：

　　对发酵罐内部进行的清洗，一方面通过处理死角减少染菌风险，另一方面防止较多残留物进入培养基或在设备上结垢形成灭菌死角。

　　清洗验证的概念：

　　证明按照已批准的清洗程序对发酵罐进行清洗，并使清洗后的发酵罐不对其后的产品质量有明显影响的有记录支持的过程。

　　要求可见的和不可见的残留物，包括前一产品的残留物或洗涤剂的残留物，达到规定的清洁限度要求，不会对即将生产的产品造成的交叉污染。

　　03、对发酵罐清洗验证的误区

　　转产验证：

　　发酵罐的清洗有不同的目的，因此可分成不同的等级，比如染菌后的清洗，转产的清洗就比正常清洗程序复杂，要求严格。

　　严谨的验证需要根据不同的等级设置验证方案，一般不能用其中一个等级的验证替代其他等级，除非正常清洗也不分等级、不计成本的执行严格的清洗方案。

　　如果某车间要从头孢菌素转产庆大霉素，在首先1罐庆大霉素发酵之前按照碱煮罐1小时，再用纯化水清洗2次的程序对发酵罐进行清洗，然后

　　1、经过取样洗罐水检测，头孢菌素残量能够达到0.03ug/ml；

　　2、罐壁擦拭残留量低于10ppm。

　　符合要求，验证结束。在网上可以搜到这篇文章，里面有残留计算方法，建议读读。

　　这一验证针对转产验证，但是将它当成发酵罐的清洗验证就以偏概全了，因为正常发酵罐的清洗程序并没有得到验证。

　　染菌后的处理程序

　　染菌罐的处理，其清洗可能仅是结束环节，更重要的工作内容是查死角及漏点等，而清洗措施也多用碱水煮罐。但是如果以碱水煮罐作为染菌清洗程序进行验证，不符合要求，因为如果前面的死角处理不好，煮多久也解决不了污染的问题。

　　核黄素作为验证指标存在理解上的偏差：

　　对核黄素作为清洗验证的指标存在一定的争议，主要是因为：

　　1、核黄素用紫外灯检测，用肉眼观察，不能定量。

　　2、核黄素喷洒浓度没有标准。

　　3、已经在FAT时验证过，所以没必要再作为清洗验证的洁净指标了。

　　以上有些道理，但只能得出核黄素不是一个优选指标的结论。

　　对于手工清洗理解偏差：

　　目前发酵罐的清洗无外三种方式，CIP，CIP+手工，纯手工。

　　手工洗罐不稳定，是因为知道要评价时，操作工会改变操作习惯，使验证结果不符合实际，所以认为没有必要对手工清洗进行验证。

　　但是，这不是手工清洗不能够验证的理由，而且并不一定要通知操作者他洗的罐是要验证的，验证也不一定只进行一次，另外还可以通过人员培训和管理措施提高手工清洗的一致性。

　　04、正常发酵罐的清洗验证

　　清洗验证后还会存在风险，因此首先一次验证之后，还需要定期进行回顾性验证或过程检查，根据实际情况对SOP进行修订。

　　以下将我们进行正常发酵罐清洗验证的要点分享出来，未来还会分享更详细的方案，敬请关注。

　　验证前准备

　　在验证方案起草前需要评估根据产品特点进行风险评估或在起草过程中对相应的文件进行确认。评估风险和文件确定的关键事项如下：

　　1、评估发酵罐清洗后，需要达到何种效果才能满足生产需要。

　　2、评估清洗程序是否稳定可重现，评估验证所需要的硬件，确定已经具备。

　　3、对清洗方法的试验数据进行评估，确定结论正确。

　　4、评估清洗效果的可接受标准。

　　5、评估取样方法是否具有可操作性：一般取样有表面擦拭取样及罐底取样两种。

　　6、评估检测方法能否达到所需精度，且在化验过程中不存在检测指标降解。

　　发酵罐清洗验证实施

　　1、清洗全覆盖，无清洗死角。

　　将核黄素喷洒到设备内表面，先让一组人员按照清洗程序对发酵罐进行清洗，再让另外一组人员用紫外灯进行观察，特别留意清洗可能的死角。

　　如果存在死角，要确认是SOP规定的清洗方法的问题，还是清洗方法执行的问题。如果是清洗方法的问题，结束验证，重新修订SOP，如果是清洗人员没有按照SOP操作，要重新操作后，再进行验证。

　　2、罐壁残留检验

　　对于一个新罐还不曾发酵，很难找一种方法来作为衡量残留的指标。企业可根据实际的检测能力确定一种能够准确检测的物质，然后在发酵罐内表面不同位置喷洒上，清洗后，再用擦试取样的方法对残留进行检测，以残留量为千分之一等指标为限度。

　　3、清洗剂残留

　　清洗剂残留，对结束的一次洗罐水放出来的不同时刻，多次取样，逐一检测，要求每次检测结果要符合要求。如果清洗剂是水,则这步可省略。

　　本文背景：

　　因为相信发酵罐清洗对终产品质量不会带来风险，目前微生物发酵过程多数设施清洗验证没有统一规范，各个企业对这些设施的清洗验证对策也不同：有些企业严格参照制药设备的标准进行验证，而有些企业不做验证。

　　本文针对微生物发酵罐的清洗验证目的，认知误区和验证方法的经验进行分享，希望对准备做发酵罐清洗验证，以及发酵过程相关设施验证的朋友有所帮助。

　　本文论述多基于经验，过程中虽也请教了同学和朋友，相信还会有不严谨的地方，所以真诚的期待同行的指正，并将经验分享到留言区，谢谢。

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